高速逆流色谱操作
时间：2020-11-21 12:30:05 来源：勤学考试网 本文已影响 人 
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高速逆流色谱操作步骤和要点
操作步骤：
配液。超声脱气约 20 min ，脱气后静置冷却至室温后泵液。
打开恒温水浴，将温度升至设定温度。
泵固定相。以 10-20 mL/min 流速泵入固定相，检测器出口端流出固定相约
20-50 mL后停泵。
4 平衡。打开紫外检测器开始预热，正转转动主机至 900 rpm（FWD为正转，
REV为反转），同时以 3 mL/min 流速泵入流动相，至出口端流出流动相且此时
紫外信号稳定，体系基本己平衡。
进样。以体系的上、下相溶解一定量的样品，超声溶解均匀后，在装样注射
器中倒入样品溶液，将进样六通问切换至 load ，推排气泡后吸液至样品全进入
进样圈中，将 load 切换至 inject ，检测器、工作站调零开始记录。
接收流分。工作站记录，设备运行时间为如 5 min，保存后采集数据，保存。
清洗。断开泵与主机的连接，将主机进口与气管出口连接，吹气；将主机中溶剂吹出后，泵入约 50 mL清洗液，吹气，重复此过程 2~3 次；最后一次长时间（ 1 小时左右直至吹干）吹气时将主机内液体吹尽。
关机。
操作要点：
本仪器适用于有机溶剂， 316L 不锈钢及 PTFE材料可耐受的酸碱溶液。
1 本设备可承受的压力限制为 2 MPa，请勿泵入不可溶解的固体颗粒。
设备运行前先检查连接管路是否正确，是否紧密；检测器波长是否正确。
配液时溶剂应混合均匀，自然分层澄清后可超声脱气，脱气时间不宜过长，脱气后如溶剂有温热则最好冷却静置至室温后使用。
样品溶解可为体系上相或下相，或同时两相溶解；不可以单一的溶剂来溶解进样，以免破坏主机内的体系平衡。
每次做完实验请及时清洗设备，一般清洗液为甲醇、乙醇等，如体系内含有酸、碱、盐等溶剂，建议先以纯净水清洗 l~2 次后，再以清洗液清洗。
6 日常清洗完设备后；如需继续进行实验，请设备放置 2 小时后重新平衡。
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操作中如有气泡、流失或其他异常现象，可致电上海同田生物技术有限公司技术支持部
2
附件 1：仪器性能检验
苯酚、间苯二酚的分离
体系：正已烷：乙酸乙酯：乙醇：水 =1：1：1.2 ：0.8
把溶剂按比例配制好，混合均匀后分相，上相用作固定相，下相用作流动相，分
别超声脱气约 20 min。
样品为苯酚、 间苯二酚，各
30
mg溶于
5
mL上下混合溶剂中
1、主机分离管
路体积的测定
用量筒取 500 毫升上相，用泵泵入主机管路内，当上相从管路的出柱口流出后，继续泵至上相流出 30 毫升，停泵，记录下量筒内剩下的上相体积，及收集到的流出上相的体积； 总体积的计算：
V 总 =500-V 剩余 -V 流出 ..
1）
式中： V 总——管路测定总体积（ mL）；
V 剩余 ------ 泵入固定相的体积后，剩余在量筒中的体积
mL）；
V 流出 ------ 流出固定相的体积（ mL）。
2、固定相保留率的测定
以 900 rpm 的转速正向旋转已被上相充满管路的主机，同时以 3.00 mL/min
的流速往分离管路内泵入流动相， 当主机出柱口管路流出流动相后， 量出被流动相推出的上相体积（ V 出）； 固定相保留率的计算：
保 留 率 = ×
100% (2)
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式中： V 总――管路总体积（ mL）
V 出――流动相推出上相体积（ mL）
V 环――进样环的体积（ mL）
保留率大于等于 40%为合格。
3、标准峰的验证
通过六通阀往上、 下相已经平衡了的管路内加入溶解好的样品， 用流动相以 3.00 mL/min
