生物分析报告报告材料中蛋白质、多肽及寡聚核苷酸样品制备、除盐耗材介绍x
时间：2020-09-20 16:10:58 来源：勤学考试网 本文已影响 人 
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生物分析中蛋白质、多肽及寡聚核苷酸样品制备、除盐耗材介绍
LC-MS是蛋白质表征的强有力工具。反向 HPLC/UPLC液相分离和 质谱联用技术是最
常用的分离模式，这种分离模式也是蛋白质除盐的有效方法。 生物制品及蛋白质溶液经常储
存在一定盐离子浓度的缓冲溶液中，如 PBS（磷酸盐缓冲溶液）。这些盐溶液，能和蛋白质形
成加和离子，使数据解析更加复杂，同时，这些盐类也抑制了 ESI-MS分析时的离子化效率。
因此，质谱分析之前，蛋白质的非挥发性盐类的去除是重要的一步。沃特世公司的
MassPREPTM 在线脱盐小柱（2.1X10 mm，Part number186004032 ）为客户提供了
简单易行，快速（小于5分钟的液相梯度，如图1），及重现性高的有效脱盐方法 ［1］。并成功 应用于12KDa~150KDa 分子量范围的完整蛋白质的脱盐 LC-MS分析（如图2）展示了这种 除盐柱用在细胞色素 C （分子量约12KDa），牛血清白蛋白BSA（分子量约62KDa），和IgG
（分子量约150KDa ）的除盐效果，而且柱容量可高达 10微克［2,3,4］。
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在蛋白质肽段及寡聚核苷酸的除盐分析方面， 沃特世 的OASIS HLB(Hydrophili
Lipohilic Bala nee) 96- 孔微洗脱板(Part number 186001828 )，是以亲水(20%N-乙
烯吡咯烷酮)-亲脂性(80%二乙烯基苯)共聚体为 填料的固相萃取96孔板［5］。乙烯吡咯烷 酮使填料具有水的可浸润性，二乙烯基苯具有反向保留能力，所以此款产品对酸性和碱性的 蛋白质多肽及寡聚核苷酸均具有更高的选择性和灵敏度 -即便填料在吸附过程中干涸也不例
外［5］。用此款产品对蛋白质多肽及寡聚核苷酸进行 LC-MS/MS 分析前的脱盐处理，可以极
大降低LC-MS/MS 分析的机制效应，提高检测灵敏度，而且其 pH应用范围宽至1-146 。
OASIS HLB96-孔微洗脱板吸附寡聚核苷酸的柱容量从 1pmol高至5000 pmol 。
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