设计性实验报告植物可溶性蛋白质和糖含量测定x
时间：2020-11-15 12:57:14 来源：勤学考试网 本文已影响 人 
设计性实验报告
题 目 植物可溶性蛋白质和糖含量的测定
课程名称： 基础生物化学实验
实验学期： 2011 至 2012 学年 第 一 学
期
植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定
摘要 本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了
可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。结果表明：生菜的蛋白质含量为（ mg/g），糖含量为 100g；苹果中蛋
白质含量为（ mg/g），糖含量为 100g。即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。
关键词 可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝 G-250 染色法，蒽酮法，含量测定
1、材料与方法
蛋白质含量测定
标准蛋白质溶液 、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果
分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等
糖含量测定
200ug/ml 标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果
试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架
2、实验步骤
蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝 G-250 染色法）
标准曲线的绘制
取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入 5ml 考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放
置 5min 左右，以 0 号试管为空白对照，在 595nm下比色测定吸光度。以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
试剂 管号
0 1 2 3 4 5
标准蛋白
0
质（ ml）
蒸馏水量
0
ml ）
蛋白质含
0 20 40 60 80 100
量（ ug）
样品测定
样品提取 分别秤取生菜、苹果鲜样 ～，用 5ml 蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，
3000r/min 离心 10min ，上清液备用。
吸取样品提取液（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入 5ml 考马斯亮蓝试剂，
摇匀，放置 2min 后在 595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。
糖含量测定
. 葡萄糖标准曲线的制作
取 6 支 20ml 具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入蒽酮试剂，再缓慢地加入 5ml 浓 H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸 10 分钟，取出冷却至室温，在 620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（
O
D），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。
. 可溶性糖的提取
称取 1 克生菜叶和苹果，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后
转入 20ml 刻度试管中，用 10ml 蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水
浴中加盖煮沸 10 分钟，冷却后 3000r/min 离心 10min，滤液收集于 100ml 容量瓶中，用
蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。
. 糖含量测定
用移液管吸收 1ml 提取液于 20ml 具塞刻度试管中， 加 1ml 水和蒽酮试剂。
再缓慢加入
5ml 浓 H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水
浴中 10 分钟（比色空白用 2ml 蒸馏水与蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温 10 分钟）。冷
却至室温后， 在波长 620nm下比色，记录光密度值。
查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量 （μ
g）。
3、结果记录及处理
（蛋白质）
苹
管号 0 1 2 3 4 5 生菜
果
蛋白质含量
0 20 40 60 80 100 Y1 Y2
（ug、 x）
吸光度（nm、y） 0
散点图表示：
标准曲线
0.7
0.6
0.5
度 0.4
光 吸光度
吸 0.3 0.2
0.1
0
0 20 40 60 80 100 120
蛋白质含量
通过计算 上表可用 y=+表示
样品中蛋白质的含量 =（ C*Vt / （Vs*Wf *1000 ）（ mg/g ）
式中： C——查标准曲线值， ug
V t ——提取液总体积， ml
W f ——样品鲜重， g
V s——测量时加样量， ml
所以 生菜中蛋白质的含量 =（ mg/g）
苹果中蛋白质的含量 =（ mg/g）
（糖）
管号
1
2
3
4
5
6
生菜
苹果
葡萄糖含量（ug、
0
40
80
120
160
200
Y1
Y2
x）
吸光度（ nm、 y） 0
散点图表示
糖含量标准曲线
0.8
0.7
0.6
度 0.5
光 0.4 吸光度（ nm、y）
吸
0.3
0.2
0.1
0
0 50 100 150 200 250
葡萄糖含量
通过计算 上表可用 y=+表示
样品中糖含量（ g/100g 鲜重）
{（计算所得糖含量（ ug） * 稀释倍数） / （样品重（ g） *10 6） }*100
则 生菜样品中糖含量 =100g
苹果样品中糖含量 =100g
4、结果讨论
结果表示生菜的蛋白质含量为 （ mg/g ），糖含量为 100g；苹果中蛋白质含量为 （mg/g ），
糖含量为 100g。即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量高于生菜。
5、收获体会
生物学是一门以实验为基础的自然科学，现代生物科学的发展尤其依赖科学实验。
在生物教学中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科学方法、培
养我们的动手能力和形成科学素质都起到了至关重要的作用。正是因此，从我们开始
接触生物这门学科开始，就不断有生物实验课程，锻炼我们各式各样的能力。生物化
学是一门严密的课程，对于其每一步，都需要我们认真操作好每一步，认真读取数据
并按照其规则准确计算。对待这样一门学科，我们必须严谨认真。
【参考文献】
《中国蔬菜》 2007 第 10 期 吴青君 龚佑辉 徐宝云
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曲亚英
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全妙华，陈东明《苹果的营养保健作用与开发利用
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王秀奇，秦淑媛，高天慧，等 ．《基础生物化学实验
( 第二版)》[ M]
