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时间：2020-11-13 13:00:22 来源：勤学考试网 本文已影响 人 
免疫学实验报告
姓名 : 买迪来木 . 坎代尔 学号 :201020131222 班级 :2010131
实验一：多克隆抗体的制备和抗体效价的检测
一：实验原理
有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好的抗体。
质量好的抗体的标准：特异性强和效价高
多克隆抗体的概念：在含有多种抗原决定簇的抗原刺激下，体内多个 B 细 胞
克隆被激活并产生针对多种不同表位的单克隆抗体， 其混和物为多 克隆抗体。
机体内所产生多克隆免疫血清实质上是由多种抗体组成的 混合物，又称多克隆
抗体。
多克隆抗体产生的基本原理：
初次反应的抗体持续时间较短，亲和力也较低，多无实际应用价值。 机体初次
接触抗原后，激发体液免疫应答反应。在 Mø 和 Th 的作用下， B 细胞
被激活 , 增生分化为浆细胞和记忆 B 细胞（ Bm）。
浆细胞产生特异性抗体。由
于初次反应时，只有少量对该抗原特异的 免疫活性细胞被诱导而增生分化为浆
细胞。随着抗原的消耗， 抑制 T 细胞（Tc）的激活和循环抗体的反馈抑制作用，
浆细胞减少，抗体滴 度很快下降。
二次反应产生的抗体主要是高亲和力的 IgG 。
机体再次受同一抗原刺激后，对
该抗原特异性的 Bm 迅速增殖分化为 浆细胞，产生特异性抗体。 Th 的记忆细
胞也加快反应的进行，在抗
原作用 1~2 天后，抗体滴度迅速上升。抗体合成率为初次反应的几 倍到几十
倍。
用于免疫的动物
用于免疫的动物可以是哺乳类和禽类，可以是 羊、马 、兔 、鸡等，实验
室常用兔、山羊和豚鼠。
动物种类的选择标准： 1. 根据抗原的生物学特性和所需获得的抗血清数。
2. 用于免疫的动物需适龄、健壮、无感染性疾病，
最好为雄性。
3. 十分注意动物的饲养，消除动物个体差异及在免
疫过程中死亡的影响。
4. 如果用兔子，最好用纯种新西兰兔，一组三只，
体重 2-3kg 为宜。
免疫途径：
途径有很多种：静脉注射、腹腔内注射、肌肉内注射、皮内注射、皮下注射、
淋巴结内注射等。 一般选择多点皮内或背部注射，每点注射 0.1ml 左右。
佐剂：
由于不同个体对于同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的也
有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性的物质，以
刺激机体产生比较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。
佐剂作用：刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进 T
细胞与 B 细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。
常用佐剂：福氏佐剂。
制备方法流程：
纯化的抗原→与弗氏佐剂一起充分乳化→注射动物体内 （剂量，次数，途
经等均要适宜，每隔两周注射一次，注射三次） →测定效价 （如效价高，
则不必加强免疫） → 1 周 后经动脉放血→分离血清→纯化抗血清备用。
抗血清的采集与保存：
收集的血液应置于室温下一小时左右，凝固后，置于 4 摄氏度下，过夜析出
血清，离心，10000rpm，10min。
在无菌条件下，析出血清，分装（0.05-0.2ml ），
贮于 -20 摄氏度以下冰箱，或冻干后贮存于 4 摄氏度冰箱保存。
二．实验步骤
器材： 剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直
头眼科手术剪（剪血管用）一把，手术刀架，手术刀片，注射器(1ml 、 10ml，
25ml) 附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶 (200ml) 或平皿（直径 18cm）、弯头止
血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布等。
2. 试剂：
生理盐水 ( 或 PBS)，
弗氏完全佐剂（ Freund’s complete adjuvant, FCA ） Sigma F-5881 ，
弗氏不完全佐剂 (Freund ’s incomplete adjuvant, FIA) Sigma F-5506 ，
兔子的选择：
兔子的重量应在四斤以上，两耳光滑，明显可见耳静、动脉，健康。
步骤：
背部多点注射法：（ 1）在家兔脊柱两旁选几个点进行皮下注射制备好的抗原，
每点注射 0.1ml 。
（2）间隔两周之后选择与上次不同的点注射
（3）再间隔两周两周，继续选择不同的点进行注射抗原。
(4) 免疫一周之后，从兔子的耳动脉取血检测抗体效价，效价
较高，则不用继续进行加强免疫，即可获得高效价的抗体。
血清的分离：
如果用三角瓶或平皿盛血， 将器皿倾斜放置于 37℃烘箱 2hr ，转移到 4℃沉淀过夜，第二天早上用吸管吸取血清。如果用离心管收集， 37℃烘箱放置 2hr ，转移
4℃沉淀过夜， 第二天早上离心， 10000RCF，10 分钟。在血清中加入 NaN3 至终浓度 0.02%，分装后 -20 ℃保存。
连续很多天都是天亮之后才睡觉。别人问我，你晚上不睡觉都在干嘛。我马上回答，写稿啊，书稿还没交呢。但其实，我一个字也没写。而之所以熬夜，也不过是因为心里有牵挂的人和未完
成的事吧。
别人问你怎么还不睡，你说不困。其实熬夜很困，打个哈欠都会有眼泪流出来，只是心中一直有所期待，有所牵挂。就好像下一秒就会收到喜欢的人的消息，下一秒就能遇见一个惊喜。
又或者，熬了太久却迟迟得不到自己想要的结果，渐渐的习惯了孤独。
为什么会熬夜呢，大概是因为白天的自己太理智，太冷漠，好像什么都不在乎。所以有些情绪和思念，心酸和不舍，是要留到深夜独自慢慢消化的。白天的自己和晚上的自己完全不是同
一个人啊，白天口口声声说一定早睡，晚上却从来做不到。像失忆一样拿命熬夜，白天开开心心无忧无虑，晚上却忧郁的不行。白天觉得我最牛逼，晚上却变成世界第一大傻逼。
总觉得幸福的人是不用熬夜的，每天都有规律的生活，爱的人就躺在身边，现在过的是想要的生活，手里牵的是喜欢的人。
昨天有人问我，为什么你晚上不睡觉。
我想了很久，已经两三年没有在两点之前入睡过了。但我也说不清为什么，那个人突然给我发了一段话，我突然觉得，这是我熬夜的原因，也是很多人熬夜的原因。
你总是习惯熬夜，然后我也故意很晚都不睡。装作是和你一样睡不着，这样就可以和你聊很久，可是你都不知道其实我要困死了。后来你走了，熬夜的习惯却怎么都改不掉。
说片面点是熬夜，说实在点是失眠，说实话是想你。
你有没有过，为了陪一个人聊天，其实下一秒已经要睡着，但还是死抓着手机不肯睡。
你有没有过，因为一个人的一句话，明明很困却突然变得很清醒，开心和喜悦赶走了所有困意。
你有没有过，为了等一个人的晚安，不停的刷着朋友圈发着动态，其实只想让他看到你还没睡。
你有没有过，因为太思念一个人，每天都害怕深夜来临，害怕孤独，害怕寂寞，害怕牵挂的感觉。
我知道，你都有过。
可是，你每天这样熬夜，有人心疼你吗？
前天晚上一个作家姐姐突然发消息说，妹妹，钱是挣不完的，别累着自己，身体最重要。昨晚她发现我又在熬夜，给我发消息说，一定照顾好自己，莫名心疼你。
我很感动，又觉得很可笑。一个没见过面的人看你熬夜都会心疼，会劝你照顾好自己，但你每天熬夜想着的那个人，没给你发过一条消息。第一次见面的陌生人都会劝你少喝酒少抽烟，
素不相识的微信好友都会让你早点休息，可你抽烟喝酒熬夜在等的那个人，从来都没在意过你，连一句晚安都没有。
我经常给别人讲道理，永远不要为了一个不爱你的人折磨自己。但这句话其实就像放屁，因为一旦爱上一个人，就没办法控制自己。我们在爱情里，从来都不是理性的。后来有人问我，
怎么忘记一个人。
我说，把酒喝够，把烟抽完，把黑夜熬成天亮，等你真的感觉疼了，你就忘记了。不撞南墙不死心，大概就是这个道理。别人苦口婆心的劝说，其实你一点儿都听不进去。你害怕失去、
害怕背叛、害怕从未拥有，你害怕的太多、心事太多，所以很难入睡。那你就熬吧，等熬过了这一阵，你又会觉得其实生活还是很美好。
你要记住，所有关于感情的问题，都不要在深夜做决定。无论分手还是牵手，无论坚持还是放弃。因为女人啊，从来都不是理性动物，再加上深夜里的一杯红酒，一根香烟，感性越发强
烈。
五年前第一次听梁静茹的《问》，歌里唱，如果女人，总是等到夜深，无悔付出青春，他就会对你真。
那时候真的傻到相信，用心爱一个人，就能把他留在自己身边。现在才明白，在一起一辈子这种事，不是嘴上说了就可以。外面的诱惑这么多，人的欲望这么大，而你能给的爱，其实就
这么多。
后来我经常说，如果爱一个人又不可得，那就找个爱自己的吧。别太累，别付出太多，别太委屈，你说你爱他所以无所畏惧，但你的感情和耐心其实就这么多，你无法永远输出。
总有一天它们会因迟迟得不到回应而枯竭。等到那一天你会发现，哪怕再遇到喜欢的人，也没有力气去喜欢了。
