血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验报告

时间：2020-11-25 13:02:05　来源：勤学考试网本文已影响人

生物化学实验报告

姓　名: 　

学号: 　

专业年级:

组　别: 　

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量

实验日期

实验地点

合作者

指导老师

评分

教师签名

批改日期

实验目得

１、1。学习醋酸纤维薄膜电泳得基本原理与操作方法;

1.2、了解电泳技术得一般原理;

１.3、掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量得方法、

二、实验原理

2、1、血清中各种蛋白质得等电点不同,一般都低于pH７。4。它们在pH8、６得缓冲液中均解离带负电荷,在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带得电荷量不同,在醋酸纤维素薄膜上电泳得速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白(Alｂumｉn)、α1－球蛋白、α２-球蛋白、β—球蛋白、γ－球蛋白5条区带。

2、２。血清中不同蛋白质得等电点、分子量及含量

血清蛋白质　　等电点　　　　分子量　　　　　占总蛋白得％

清蛋白　　　 4、6４　　　　69,000 　　　　５７～７2

α1－球蛋白　　 5、06 ２０0,000 ２～5

α2-球蛋白　　　 5。0６　　　300,０00 　　　　　　４～9 　

β－球蛋白　５.１2 　　　 90,０00~150,0０0 　　　　6、5~12

γ－球蛋白　 6。85～7、3 　 1５６,０00～９５0,０００　　　12~2０

缓冲液pＨ=８.6,pI〈pH。

血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动。

预测血清蛋白电泳区带图

血清蛋白依次分为清蛋白,球蛋白得α1、α２、β、γ五个区带

2、3。①膜条经过氨基黑1０B染色后显出清晰色带;②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比;③可将各色带剪开,分别溶于碱性溶液中;④用分光光度法计算各种蛋白质得百分数。

三、材料与方法:

3.1.实验材料:

3、1。１.实验试剂:①样品:健康人血清(新鲜、无溶血);②巴比妥－巴比妥钠缓冲液(ｐH8。６,离子强度0.06mｏl/L);③氨基黑1０B染色液;④漂洗液;⑤洗脱液:0、4moｌ/ＮａOＨ溶液。

３。1、2。实验器材:①Ｖ-1100分光光度计(×1);②恒温水浴箱(×１);③试管(×6)、试管架(×1);④1000μL加样枪(×1)、加样枪架(×1);⑤醋酸纤维薄膜(2cm*８ｃm,厚度１20μm);⑥培养皿(×5);⑦点样器或载玻片(×1);⑧平头镊子(×2);⑨剪刀(×１);⑩电泳槽(×１);?直流稳压电泳仪(×１)

　3。２。实验步骤

准备与点样:①取2×8cm得膜条;②亚光面距一端1、5cm处取一点样线;③充分浸透在巴比妥缓冲液中;④取出膜条,用滤纸吸去多余得缓冲液;⑤点样器下端粘上薄层血清;⑥垂直点样。

点样示意图:

注意:点样线尽量点得细窄而均匀。

+——8cm

——

8cmm

2cm

点样线

点样区

1、5cm

(粗面)